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第一节毛细管色谱,第二章 色谱法的新技术,1.毛细管色谱柱的结构特点,1不装填料阻力小，长度可达百米的毛细管柱， 管径0.2mm。2气流单途径通过柱子，消除了组分在柱中的涡流扩散。3固定液直接涂在管壁上，总柱内壁面积较大,涂层很薄，则气相和,

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1、第七章色谱分离技术,1,随着科学的进步，某些关系到人们生命安全的生物药品，尤其是注射药品和生物工程产品等，都需要高度纯化。但是，经典的分离方法（如萃取、结晶等）很难满足需要。 色谱法应运而生。,产生的必然性,2,色谱分离是一组相关技术的总称，又叫做色谱法、层析法，是一种高效而有用的生物分离技术。 是产品的最后纯化工序（精制），即在用色谱纯化之前需要经过其他方法进行提取和初步纯化。 近40年来，色谱技术已成为生物大分子分离和纯化技术中极重要的组成部分。 胰岛素、干扰素、疫苗、抗凝血因子、生长激素等。,3,概述,化学分析方法的基本要求是其选择性要高。即，在分析过程中，待测物与潜在的干扰物的分离是最。

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2、为重要的步骤！ 20 世纪中期，大量采用一些经典的分离方法：沉淀、蒸馏和萃取。 现代分析中，大量采用色谱和电泳分离方法。迄今为止，色谱方法是最为有效的分离手段！其应用涉及每个科学领域。 1903年，俄国植物学家MikhailTswett 最先发明。他采用填充有固体CaCO3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素chlorophylls “graphein”=write) 。 20世纪50年代，色谱发展最快（一些新型色谱技术的发展，复杂组分分析发展的要求）。,4,色谱法的发展历史,5,色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作,6,色谱分离基本原理： 使用外力使含有样品的流动相（气体、液体。

3、或超临界流体）通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。处于柱起始端的样品中各组份与两相进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，而与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个组份的“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出的各个组份物质可分别进行定性、定量分析。,7,8,色谱分类方法,按照分离过程中相系统的形式和特征，可分为：柱色谱法 填充柱色谱法 毛细管色谱法平板色谱法 纸色谱法 薄层色谱法,9,按流动相，可分为： 气相色谱法 液相色谱法超临界色谱法按固定相物态，气相色谱法可分为： 气固色谱法 气液色谱法按。

4、流动相物态，液相色谱法可分为： 液固色谱法 液液色谱法,柱色谱法的分类见表8-1。,10,11,按色谱动力学过程，可分为：洗脱色谱顶替色谱迎头色谱,洗脱色谱(a)、顶替色谱(b)、迎头色谱(c),12,按组份在固定相上的物理化学原理，分为：吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同；分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同；离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换 剂）上的亲和力不同；凝胶色谱:（尺寸排阻色谱）：不同尺寸分子在固 定相上的渗透作用；,13,色谱法的特点,1 分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。2 灵敏度高 可以检测出10-1110-13g的物质量。3 分析速。

5、度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。4 应用范围广 气相色谱：沸点低于400的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。 不足之处： 被分离组分的定性较为困难。,14,概述吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法凝胶色谱法高效液相色谱法亲和色谱法,15,一、概述,1.发展史,创始人：茨维特（Tsweet）1906,石油醚,连续色带色层或色谱色谱法得名,纸色谱,薄层色谱,气相色谱,高效液相色谱,离子色谱、凝胶色谱、亲和色谱,16,2.色谱法的特点,（1）概念 色谱法是一种物理的分离方法，利用不同物质在两相中具有不同的分配系数，并通过两相不断的相对运动。

6、而实现分离的方法。 其中一相是固定相，通常是表面积很大的或多孔性固体；另一相是流动相，是液体或气体。,17,流动相流经固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离；或者说，易分配于固定相中的物质移动速度慢，易分配于流动相中的物质移动速度快，因而逐步分离。,18,（2）基本特点： 分离效率高。其效率是所有分离纯化技术中最高的，这种高效的分离尤其适于极复杂混合物。 应用范围广。（非）极性、（非）离子型、小分子和大分子、无机和有机及生物活性物质、热（不）稳定化合物；尤其是对生物大分子的分离，其他方法无法取代。 选择性强。可变参数很多：不同的色谱分离方法、固定相和流动相、操作条件。 设备简单，操作方便，且不含强烈的操作条件，因而不容易使物质变性，特别适于不稳定的大分子有机化合物。,19,缺点： 处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此主要用于实验室，工业生产上应用较少。,20,3.色谱法的分类,分离机理操作方法流动相的物态实验技术,吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法凝胶色谱法亲和色谱法,柱色谱法纸色谱法薄层色谱法,气相色谱法液相色谱法,迎头法顶替法洗脱分析法,21,4.。