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第七章色谱分离技术,1,随着科学的进步，某些关系到人们生命安全的生物药品，尤其是注射药品和生物工程产品等，都需要高度纯化。但是，经典的分离方法如萃取结晶等很难满足需要。 色谱法应运而生。,产生的必然性,2,色谱分离是一组相关技术的总称，又叫,

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1、第八章,薄层色谱、柱色谱和纸色谱,2,一 概 述,一 概 述,色谱法也称色层分析（层析），是20世纪初俄国植物学家Michael Tswett发现并命名的。他将植物叶子的色素溶液通过装填有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开。,3,色谱法：分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。,色谱法基本原理：利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。,流动的体系称为流动相（气体或液体）；固定不动的物质称为固定相（可以是固体或液体）。,根据操作条件不同，可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气。

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地图的分幅与编号,军事地形学教学课件识图基础,课 堂 设 计,课目：地形图分幅与编号目的：了解分幅与编号的方法，学会分幅与编号 的应用。内容：一分幅与编号的方法 二分幅与编号的应用 三图名 方法：理论讲解多媒体辅助教学重点：第一二个内容难点,

2、相色谱及高效液相色谱等类型。,4,本章学习 ：薄层色谱（Thin Layer Chromatography）纸色谱 （Paper Chromatography） 柱色谱 （Column Chromatography）,5,薄层色谱（TLC，薄层层析）,特点：所需样品少，分离时间短，效率高。,应用：精制样品，鉴定化合物，跟踪反应进程和为柱色谱摸索最佳条件等。,按铺到薄层上的固体性质，薄层色谱可分为：吸附薄层色谱分配薄层色谱离子交换色谱排阻薄层色谱（凝胶薄层色谱）,6,由于吸附剂（强极性）对样品中各组分吸附能力不同，当展开剂（有机溶剂）流经吸附有样品的吸附剂时，样品中的各组分在固定相和作为展开剂的。

3、流动相之间不断地发生解吸、吸附、再解吸、再吸附的分配过程。极性小的组分从吸附剂上解吸较易，随展开剂较快地移动；极性大的组分从吸附剂上解吸较难，随展开剂移动较慢。不同组分上升的距离不同而形成彼此分开的斑点从而达到分离。,吸附薄层色谱的工作原理：,展开剂（流动相）,吸附剂（固定相）,样品点（多组分）,7,薄层色谱法的基本操作过程,（1）根据被分离物质的性质选择吸附剂，最常用的是硅胶和氧化铝，其次是纤维素、硅藻土、聚酰胺等；（2）薄层板的制备；（3）点样；（4）展开；（5）显色，Rf值计算。,8,1、选择吸附剂（1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离。（2）氧化铝：碱性极性固定相，适用。

4、于碱性、中性物质分离。（3）纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分离亲水性物质。（4）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离。,9,最常用的吸附剂硅胶G（含有煅石膏作黏合剂）、硅胶H（不含黏合剂或其他添加剂）、硅胶HF 254（含有荧光剂，可在254nm 紫外光下观察）、硅胶GF254（含有煅石膏和荧光剂），其次有氧化铝H、氧化铝G、氧化铝HF254、氧化铝GF254、硅藻土、硅藻土G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等。,10,2、薄板的制备 薄层板的好坏将决定分离的效果。薄层板应该尽量均匀且厚薄一致。（1）使用铺板器：将洁净干燥的玻璃板置于铺板器中间，在铺板槽中倒入糊状。

5、物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。见下图：,11,1、吸附剂薄层，2、涂布槽，3、玻璃夹板，4、玻璃板，5、玻璃夹板,12,（2）倾注法：将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。,13,3、薄层板的活化 将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干后（应避免阳光直射，以防开裂），放在烘箱内加热活化。硅胶板需在烘箱内慢慢升温至105-110度后保温30分钟；氧化铝板需在200-220度烘4小时，可得到活性I级的薄板，吸附层的活性随含水量的降低而增加。活化好的薄板应保存在干燥器中备用。,14,15,。

6、4、点样 将待测样品溶液在极性尽可能低的溶剂中配成1%的溶液。用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上，点样基线距底边1-2cm，样品点直径在1-1.5mm之间,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，距边缘在5mm（以免边缘效应影响分离）。点样时必须注意勿损伤薄层表面。正常斑点应是圆形或椭圆形色斑。,16,点样要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。点样量应适中，过多会引起斑点拖尾，分离度变差。手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 5ul），微量注射器。,17,自动点样Limomat IV 喷样仪样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。自动薄层色谱点样仪由计算机控制。药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。,18,注意：（1）点样量对分离效果影响很大，而且还与显色剂灵敏度、吸附剂类型有关。样品量过少，展开后斑点不清晰，影响观察；样品量过多，展开后拖尾严重，易造成Rf值接近的斑点相连。（2）样品浓度过稀，可在同一斑点处重复。